DHPLC- en MS-onderzoeken van een foto-geïnduceerde intrastrand-crosslink in DNA gelabeld met 5-broom-2′-deoxyuridine

Het is algemeen bekend dat de vervanging van thymidine door 5-broom-2′-deoxyuridine (BrdU) in DNA het gevoelig maakt voor UVB-licht. Bestraling van een op zo’n manier gesubstitueerd biopolymeer leidt tot allerlei soorten DNA-schade, zoals intrastrand-crosslinks, enkel- en dubbelstrengs breuken of alkali-labiele websites die in het verleden werden bestudeerd met een breed spectrum aan analytische methoden. Hier tonen we aan dat volledig denaturerende high-performance vloeistofchromatografie (DHPLC), tot nu toe onderschat in DNA-schadestudies, zou kunnen werken als een goedkope vervanging met hoge resolutie voor de algemeen gebruikte gelelektroforese.

We rapporteren over de DHPLC/massaspectrometrie (MS) -analyses van fotolyten die zijn verkregen met de UV-bestraling van waterige oplossingen die 40 basenparen van een lang, dubbelstrengs oligonucleotide bevatten, gelabeld met BrdU in een van zijn strengen. Het UV-product werd gedetecteerd met HPLC bij een temperatuur van 70°C. Daaropvolgende MS-analyse met elektrospray-ionisatie (ESI-MS) van het fotolyt , enzymatische digestie van het bestraalde materiaal en HPLC- en MS-analyse (LC-MS) van het digest toonde ondubbelzinnig aan dat een intrastrand covalent dimeer, waarbij adenine en uracil betrokken zijn, wordt gevormd in het bestraalde systeem.

Vermeende rol van geleedpotigen  vectoren  in de Afrikaanse varkenspest  Virus  Transmission in relatie tot hun Bio-Ecologisch Properties

Afrikaanse varkenspest (AVP) is een van de belangrijkste ziekten bij Suidae vanwege de aanzienlijke gezondheids- en sociaaleconomische gevolgen en vormt een grote bedreiging voor de Europese varkensindustrie, vooral bij gebrek aan beschikbare behandeling of vaccin. Met zijn hoge sterftecijfer en de daaropvolgende handelsbeperkingen die aan de getroffen landen worden opgelegd, kan AdZG de varkensindustrie in de getroffen landen zelfs drastisch ontwrichten.

In september 2018 werd AVP onverwachts geïdentificeerd bij wilde zwijnen uit Zuid-België in de provincie Luxemburg, niet ver van de Frans-Belgische grens. De Franse autoriteiten hebben snel een deskundig advies gevraagd over het risico van introductie en verspreiding van AVP in Europees Frankrijk. In Europa zijn de belangrijkste transmissieroutes van het virus direct contact tussen besmette en gevoelige dieren en indirecte transmissie by way of besmet materiaal of voer.

De seizoensgebondenheid van de ziekte in sommige varkenshouderijen in de Baltische landen, waaronder uitbraken in bedrijven met hoge bioveiligheidsniveaus, hebben echter geleid tot vragen over de mogelijke betrokkenheid van geleedpotigen bij de overdracht van het virus. Deze recensie onderzoekt de huidige hoeveelheid kennis over de meest voorkomende geleedpotige households die aanwezig zijn in Europees Frankrijk. We onderzoeken hun potentiële rol in de verspreiding van AVP – door actieve biologische of mechanische transmissie of door passief transport of opname – in relatie tot hun bio-ecologische eigenschappen.

Het benadrukt ook het bestaan ​​van significante hiaten in onze kennis over vectorecologie in gedomesticeerde en wilde zwijnenomgevingen en in vectorcompetentie voor ASFV-transmissie . Het opvullen van deze lacunes is essentieel om de transmissie van AVP beter te begrijpen om zo gepaste beheersmaatregelen te kunnen implementeren.

Replicatie-competent vesiculaire stomatitis  virus  vaccin  vector  beschermt tegen SARS-CoV-2-gemedieerde pathogenese

Ernstig acuut respiratoir syndroom coronavirus 2 (SARS-CoV-2) heeft miljoenen menselijke infecties en honderdduizenden doden veroorzaakt. Dienovereenkomstig is een effectief vaccin van cruciaal belang bij het verminderen van de door het coronavirus veroorzaakte ziekte 2019 (COVID-19) en het inperken van de pandemie. We ontwikkelden een replicatiecompetent vesiculair stomatitisvirus (VSV)-gebaseerd vaccin door een gemodificeerde vorm van het SARS-CoV-2 spike-gen te introduceren in plaats van het natieve glycoproteïne-gen (VSV-eGFP-SARS-CoV-2). Immunisatie van muizen met VSV-eGFP-SARS-CoV-2 wekt hoge titers van antilichamen op die SARS-CoV-2-infectie neutraliseren en zich richten op het receptorbindende domein dat humaan angiotensine-converterend enzym-2 (ACE2) aangrijpt.

Na provocatie met een humaan isolaat van SARS-CoV-2, vertonen muizen die humaan ACE2 tot expressie brengen en geïmmuniseerd zijn met VSV-eGFP-SARS-CoV-2 een sterk verminderde virale infectie en ontsteking in de lengthy, wat wijst op bescherming tegen longontsteking. Ten slotte beschermt passieve overdracht van sera van VSV-eGFP-SARS-CoV-2-geïmmuniseerde dieren naïeve muizen tegen SARS-CoV-2-uitdaging . Deze gegevens ondersteunen de ontwikkeling van VSV-eGFP-SARS-CoV-2 als een verzwakt, replicatiecompetent vaccin tegen SARS-CoV-2.

De niet- virale  vectoren  en belangrijkste methoden om siRNA op de titaniumimplantaten te laden en hun toepassing

Oppervlaktemodificatie van titaniumimplantaten door siRNA is vrij efficiënt voor het verbeteren van de osseo-integratie van implantaten. Het laden van siRNA op hun oppervlak is een cruciale issue voor siRNA-gefunctionaliseerde implantaten om hun biologische functie te realiseren. Directe binding van siRNA aan implantaten heeft een lage bindings- en afgiftesnelheid van siRNA, dus meestal moet het worden gemedieerd door vectoren.

Polymere, niet-materiaal-gemedieerde en op lipiden gebaseerde vectoren zijn typen niet-virale vectoren die gewoonlijk worden gebruikt voor het afleveren van siRNA. Drie belangrijke methoden van laadproces , namelijk eenvoudige fysieke adsorptie, laag-voor-laag assemblage en elektrodepositie, worden ook samengevat. Een korte introductie, het basisprincipe en de algemene process van elke methode zijn opgenomen.

De laadefficiëntie, die zowel kwalitatief als kwantitatief kan worden gemeten, samen met gen-knockdown- efficiëntie, cytotoxiciteitstest en osteogenese van de drie methoden worden vergeleken. In deze assessment zijn ook heel wat toepassingen in osteogenese beschreven.

Productie van op transmissie-defecte RNA- virus gebaseerde episomale  vector  met hoge titer  met behulp van tangentiële stroomfiltratie

In de afgelopen jaren hebben op virale vectoren gebaseerde in vivo genafgiftestrategieën een vital succes behaald bij de behandeling van genetische ziekten . Op RNA-virus gebaseerde episomale vector zonder viraal glycoproteïne-gen (ΔG-REVec) is een niet-transmissief genafgiftesysteem dat langdurige genexpressie in verschillende celtypen in vitro mogelijk maakt, maar in vivo genafgifte is niet succesvol geweest vanwege problemen bij de productie van vectoren met een hoge titer.

In de huidige studie laten we zien dat tangentiële stroomfiltratie (TFF) effectief kan worden gebruikt om de titer van ΔG-REVec te verhogen. Concentratie en diafiltratie van ΔG-REVec met behulp van TFF verhoogde de titer aanzienlijk zonder verlies van infectieuze activiteit. Belangrijk is dat intracraniële toediening van vector met hoge titer aanhoudende transgenexpressie in knaagdierhersenen mogelijk maakte. Dit artikel is auteursrechtelijk beschermd. Alle rechten voorbehouden.