een vergelijking van Platform Technologieën voor  Viral  Vector  Production

designblast

designblast

Gebruik van PCR- DHPLC met fluorescentiedetectie voor de karakterisering van de bacteriële diversiteit tijdens cassave (Manihot esculenta Crantz) fermentatie

Denaturerende hogedrukvloeistofchromatografie (DHPLC) is beschreven als een geschikte methode om DNA-polymorfismen te bestuderen. Hier werd cassave (Manihot esculenta Crantz) fermentatievloeistof onderzocht met behulp van DHPLC- analyse om de bacteriële diversiteit tijdens het fermentatieproces te karakteriseren. GC-geklemde amplicons die overeenkomen met een variabel gebied van de bacteriële gemeenschap 16S rDNA werden gesynthetiseerd met behulp van polymerasekettingreactie (PCR) en vervolgens opgelost op foundation van base-samenstelling met behulp van preparatieve DHPLC.

Eluaatfracties werden willekeurig verzameld en gebruikt als een bron van DNA van de hele gemeenschap dat kon worden gebruikt om de bacteriële diversiteit te bepalen. Als eerste benadering werden GC-klemmen verwijderd uit de geëlueerde DNA-fragmenten met behulp van PCR om de mogelijke vertekening te vermijden die deze klemmen zouden kunnen veroorzaken tijdens de constructie van kloonbibliotheken. Als tweede benadering werd een kloonbibliotheek van elk eluaatmonster geconstrueerd, waarbij de GC-klemmen van de DNA- fragmenten werden bewaard .

De eerste benadering genereerde 132 bacteriële rDNA-sequenties met een gemiddelde grootte van 200 bp, waarvan 45% overeenkomsten vertoonde met niet-kweekbare of niet-geclassificeerde bacteriën. De tweede benadering produceerde 194 sequenties geïdentificeerd als Proteobacteria (48%), niet-gecultiveerde of niet-geclassificeerde omgevingsbacteriën (40%) en Firmicutes (12%). We ontdekten een opmerkelijk grotere bacteriële diversiteit met behulp van de eerste benadering dan de tweede benadering. De DHPLC-PCR- methode maakte de snelle en niet-moeizame detectie mogelijk van een enorme bacteriële diversiteit die werd geassocieerd met cassavefermentatie, en we concluderen dat het een veelbelovend alternatief is voor de karakterisering van de algehele microbiële diversiteit in complexe monsters.

Gebruik van denaturerende hogedrukvloeistofchromatografie ( DHPLC ) om de bacteriële en schimmelmicrobiota van de luchtwegen van patiënten met cystische fibrose te karakteriseren

Het doel van deze studie was om het gebruik van denaturerende high-performance vloeistofchromatografie (DHPLC) te evalueren om cystische fibrose (CF) luchtwegmicrobiota te karakteriseren, waaronder zowel bacteriën als schimmels. DHPLC-omstandigheden werden eerst geoptimaliseerd met behulp van een mengsel van V6-, V7- en V8-regio 16S rRNA-gen PCR-amplicons van 18 bacteriesoorten die vaak worden aangetroffen bij CF-patiënten.

Vervolgens werd de microbiële diversiteit van four sputummonsters van four CF-patiënten geanalyseerd met behulp van culturele methoden, klonen/sequencing (alleen voor bacteriën) en DHPLC-piekfractieverzameling/sequencing . DHPLC-analyse maakte het mogelijk meer bacterie- en schimmelsoorten te identificeren dan de klassieke kweekmethoden, waaronder goed erkende pathogenen zoals Pseudomonas aeruginosa.

Zelfs als een lager aantal bacteriële operationele taxonomische eenheden (OTU’s) werd geïdentificeerd door DHPLC , was het mogelijk om OTU’s te vinden die niet waren geïdentificeerd door klonen / sequencing. De combinatie van beide technieken maakte het mogelijk om de meeste DHPLC-pieken te correleren met gedefinieerde OTU’s .

Ten slotte, hoewel de detectie van Aspergillus fumigatus met behulp van DHPLC nog steeds kan worden verbeterd, heeft deze techniek het duidelijk mogelijk gemaakt om een ​​groter aantal schimmelsoorten te identificeren dan met klassieke op kweek gebaseerde methoden. Concluderend leverde DHPLC zinvolle aanvullende gegevens over pathogene bacteriën en schimmels, evenals veeleisende micro-organismen die aanwezig zijn in de CF-luchtweg. DHPLC kan worden beschouwd als een aanvullende techniek voor cultuurafhankelijke analyses in routinematige microbiologische laboratoria.

designblast
designblast

Productie van Gemodificeerde Vaccinia Ankara  Virus  door een intensievere Cell culturen: een vergelijking van Platform Technologieën voor  Viral  Vector  Manufacturing

Gemodificeerd Vaccinia Ankara (MVA)-virus is een veelbelovende vector voor vaccinatie tegen verschillende uitdagende pathogenen of de behandeling van sommige soorten kanker. Omdat deze vector zich niet kan vermenigvuldigen in menselijke ontvangers, is een grote hoeveelheid virionen per dosis vereist voor vaccinatie en gentherapie. Stroomopwaartse procesintensificatie waarbij perfusietechnologieën, de aviaire suspensiecellijn AGE1.CR.pIX en de virusstam MVA-CR19 worden gecombineerd, is een optie om zeer hoge MVA-opbrengsten te verkrijgen.

Hier vergeleken we verschillende opties voor celretentie in perfusiemodus met behulp van conventionele bioreactoren met geroerde tank, waaronder een alternerend tangentiale stroomfiltratiesysteem, een akoestische kolonist en een hellende kolonist. De laatste twee opties maakten een proceed oogst van MVA-virussen mogelijk . Verder bestudeerden we bioreactoren op foundation van holle vezels en een orbitaal geschudde bioreactor in perfusiemodus, beide beschikbaar voor eenmalig gebruik. De productiviteit voor de virusstam MVA-CR19 werd vergeleken met resultaten van batch- en proceed productie zoals gerapporteerd in de literatuur.

Onze resultaten tonen aan dat het MVA-virus zeer stabiel is bij 37°C in celcultuur, zodat celretentie-apparaten alleen nodig zijn om de celconcentratie te maximaliseren, maar niet voor continu oogsten. Met behulp van een bioreactor met geroerde tank resulteerde een perfusiestrategie gedurende de hele run met uitbreiding van het werkvolume na virusinfectie in de hoogste opbrengsten.

Over het algemeen  werden in deze geïntensiveerde processen infectieuze MVA-virustiters van 2,1-16,5 x 109 virions/ml bereikt. Alles bij elkaar genomen toont de studie een nieuw perspectief op de productie van MVA-virussen met een hoog rendement in conventionele bioreactorsystemen die zijn gekoppeld aan verschillende celretentie-apparaten en behandelt opties voor procesintensivering, waaronder volledig perfusieplatforms voor eenmalig gebruik. Dit artikel is auteursrechtelijk beschermd. Alle rechten voorbehouden.

Mosaic Recombinant Adeno-associated  Virus  Vector  rAAV/DJ/CAG voor gerichte genafgifte aan melanoomcellen die zijn uitgezaaid naar de lengthy

Achtergrond/doel:  Patiënten met uitgezaaid melanoom hebben beperkte behandelmogelijkheden en een slechte diagnose. Daarom vereist de ontwikkeling van behandelingen een nieuwe therapeutische benadering, waarvan gentherapie met behulp van rAAV-vectoren kan worden voorgesteld. Het doel van de studie was om de efficiëntie van de rAAV-vector te onderzoeken om muizenmelanoomcellen zowel in vitro als in vivo te transduceren.

Materialen en methoden:  In de experimenten werden verschillende rAAV-serotypen gebruikt die coderen voor GFP onder de controle van zowel kippen-bèta-actine als cytomegalovirus-promoters . Intranasale, intraperitoneale, intraveneuze en intratumorale toedieningsroutes van rAAV-vectoren werden getest met behulp van kwantitatieve PCR en immunohistochemische kleuring.

Resultaten:  De hoogste transductie efficiëntie in metastatische cellen in vivo waargenomen 7 dagen na intranasale toediening van 10 een 10  gc / 0,03 ml dosis van rAAV / DJ-CAG.

Conclusie:  Melanoomgentherapie op foundation van rAAV-vectoren is een mogelijke behandelingsoptie.

Vector  Bevoegdheid van  Aedes aegypti, Aedes albopictus  en  Culex quinquefasciatus  uit Brazilië en Nieuw-Caledonië voor Three Zika  Virus  Lineages

Het Zika-virus (ZIKV) heeft vanaf 2015 ernstige epidemieën veroorzaakt in Zuid-Amerika, nadat het zich in de Stille Oceaan had verspreid. We hebben de vectorcompetentie van tien populaties van  Aedes  aegypti  en  Ae vergeleken. albopictus  uit Brazilië en twee van  Ae.  aegypti  en een van  Culex quinquefasciatus  uit Nieuw-Caledonië om drie ZIKV-isolaten over te dragen die behoren tot Afrikaanse, Aziatische en Amerikaanse lijnen.

Onlangs gekoloniseerd muggen acht verschillende plaatsen uit beide landen werden oraal met dezelfde virale lading (10 7  TCID 50 / ml) en onderzocht na 7, 14 en 21 dagen. Cx. quinquefasciatus  was ongevoelig voor infectie met alle virusstammen. Daarentegen, hoewel competentie varieerde met geografische oorsprong, Braziliaanse en Nieuw-Caledonische  Ae. aegypti  kon de drie ZIKV-lijnen overbrengen, met een sterk voordeel voor de Afrikaanse lijn (de enige die een week na de problem speeksel bereikte).

Braziliaanse  Ae. albopictus-  populaties waren minder competent dan  Ae. aegyptische  bevolking. Ae. albopictus vertoonde  over het algemeen bijna geen overdracht voor Aziatische en Amerikaanse lijnen , maar was efficiënt in het overbrengen van de Afrikaanse ZIKV. Virale surveillance en maatregelen ter bestrijding van muggen moeten worden versterkt om de verspreiding van nieuwe ZIKV-lijnen te voorkomen en de overdracht van virussen die momenteel circuleren tot een minimal te beperken.

Related Post

Leave a Reply

Your email address will not be published. Required fields are marked *